| Comunicación Nº: 051 | English version  |
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S. Frede, S. Ortiz, E. Hliba
[Título] [Introducción] [Resultados] [Iconografía] [Discusión] [Bibliografía]
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Los materiales estudiados fueron: endometrio normal,Pólipo glandular,endometrio con Hiperplasia Glándulo quística sin Atipia,Hiperplasia con Atipia y
Carcinoma endometrial bien diferenciado
Todos los materiales poseían diagnóstico histopatológico previo, habiéndoselos revisado nuevamente.
Para la Técnica de Lectinas unidas a Peroxidasa,se realizaron secciones de aproximadamente 5 micras que fueron montadas con Poly -L Lisina.Una vez desparafinadas con xilol y deshidratadas, se bloqueó la peroxidasa endógena con H202 y metanol al 0,6% durante 30 min. a 37 grados C. Se incubó con la Lectina correspondiente,unida a peroxidasa durante 45 min. en cámara húmeda a T.A. Como controles se utilizaron baños con el azúcar correspondiente a cada Lectina (galactosa,glucosa,manosa,fucosa) al 0,2M
Para el revelado se utilizó Diaminobencidina (DAB),deteniéndose el mismo con agua bidestilada.El contraste de las estructuras histológicas fue realizado con Hematoxilina. Todas las Lectinas fueron de Lab. Sigma,con excepción de Agaricus Bisporum (ABL) que fue purificada y aislada de un hongo de Villa Allende,Córdoba, por el Dr. F.Irazoqui,Dto de Bioquímica Clínica, Fac. de Cs.Qs. Córdoba.
Las Lectinas fueron utilizadas en diferentes concetraciones que oscilaron entre 1 microg./ml,
20 micrg/ml,40 microg. /ml..-
Las mismas fueron las siguientes:
CONCAVALINA A ( CON A) que se une a Alfa D Glucosa y Alfa D Manosa.
ARACHIS HIPOGEA (PNA) que reconce Alfa D Galactosa y (1--3) N Acetilgalactosa-
mina. ( N-Gal Nac) . Esta lectina se une a los oligosacáridos mencionados en unión Alfa, y Beta ,pero en ausencia de Acido Siálico.
AGARICUS BISPORUM ( ABL) reconoce las mismas sustancias que PNA pero sólo lo hace en la glicoforma Alfa, y en presencia de Acido Siálico.
ULEX EUROPAEUS (U E 1), reconoce y se une a Fucosa,único monosacárido en posición L (levógira) en mamíferos. Además se la utiliza como un excelente marcador vascular.
WHEAT GERM (W G) tiene especificidad por Glucosa unida a grupos aminos (glucosaminil y a residuos de Acido Siálico) (2Neu Nac)
DOLICHUS BIFLORUS (DBA) que reconoce Alfa D-N Acetilgalactosamina.
Las estructuras que se observaron en las secciones histológicas fueron: borde luminal, borde basal, secreción, citoplasma, y estroma. La medición se realizó en cruces: 0/+/++/+++, teniendo en cuenta Extensión e Intensidad de la reacción.
Las secciones histológicas marcadas con PNA sufrieron digestión enzimática con Neuraminidasa tipo VI (Sigma) y en los tejidos marcados con CON A la digestión enzimática se realizó con Tripsina (Sigma) al 0,1% durante 15 min. a 37 Grados Centígrados.
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