Comunicación
Nº 046
Comunicación |
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[Título] [Introducción] [Material y Métodos] [Resultados] [Iconografía] [Bibliografía]
El método diseñado permite cuantificar las bandas de ácidos nucléicos desarrollados en gel de agarosa mediante captura de una imagen digital del gel y procesamiento de la imagen para la segmentación de las áreas de banda y determinación automática de la densitometría y superficie de las mismas. Los resultados de validación muestran que los valores de DOMI cuantificados con ambos métodos presentan una correlación lineal significativa con las cantidades de estándar presentes realmente en cada banda mayor que los valores de DOMC y de AREA de las mismas bandas (Fig. 2). El análisis del producto entre el cociente de las cantidades de "estándar" de dos bandas consecutivas (proporciones de estándar) con el cociente inverso de los correspondientes valores de los parámetros medidos por análisis digital de imagen (proporciones de DOMI, DOMC y AREA), muestra que la DOMC presenta proporciones mejores que la DOMI, en particular para el método de aislamiento individual de banda. Sin embargo, las diferencias de sus valores y proporciones entre réplicas sucesivas son mayores que para la DOMI, resultando ser significativas con el método de segmentación individual de las bandas. Por el contrario, ni los valores de DOMI, ni el producto inverso entre sus proporciones y las correspondientes proporciones de estándar de bandas consecutivas presentaron diferencias significativas entre réplicas o entre métodos, lo que ocurre para los valores y proporciones de AREA. Por lo tanto, la DOMI cuantificada mediante el método realizado resulta ser el parámetro más fiable y preciso para la cuantificación de bandas de ácidos nucléicos de forma objetiva y reproducible.
Además, el hecho de que la DOMI no presente diferencias significativas entre los valores obtenidos mediante los dos métodos de segmentación de bandas, permite que nuestro método sea válido también utilizando una umbralización individual para la segmentación de las bandas. Esto resulta particularmente útil cuando el rango de niveles de gris de las bandas a cuantificar sea tan amplio que no permite un correcto aislamiento de las áreas de todas las bandas mediante una umbralización global de la imagen.
Los resultados de validación demuestran también que los valores densitométricos (DOMC) sin tener en cuenta la superficie de banda correspondiente, proporcionados por los analizadores de imagen de geles actualmente disponibles en el mercado, pueden determinar cuantificaciones no precisas y generar errores a la hora de evaluar proporciones entre diferentes bandas de ácidos nucléicos.
Los algoritmos de análisis de imagen diseñados y aquí presentados pueden implementarse utilizando cualquier programa de análisis de imagen, incluidos los disponibles gratuitamente en internet. Esto hace de nuestro método una herramienta de bajo coste y muy fiable para la cuantificación de ácidos nucléicos.
En conclusión, el método automatizado de análisis de imagen ilustrado en este trabajo representa un simple instrumento de bajo coste y gran utilidad para la cuantificación de las bandas de ácidos nucléicos desarrollados en gel de agarosa de forma exacta, objetiva y reproducible.
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