Comunicación       Nº 046

Indice

Cuantificación de Ácidos Nucléicos Desarrollados en Gel de Agarosa. Diseño y Validación de un Método Simple de Análisis Digital de Imagen.

[Título] [Material y Métodos] [Resultados] [Discusión] [Iconografía] [Bibliografía]

Introducción

En la actualidad las técnicas moleculares están siendo incorporadas en los laboratorios de anatomía patológica como técnicas de apoyo o de confirmación diagnóstica de lesiones neoplásicas, o de etiología viral¹. Una de sus aplicaciones en este campo es el estudio de la expresión del mRNA, que requiere el establecimiento de controles internos de la calidad de la reacción, normalización de las muestras, así como de un adecuado método de cuantificación, ya que la correcta cuantificación de los resultados experimentales es fundamental. En este sentido se han desarrollado técnicas como la reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (PCR-cuantitativa) para mejorar los resultados de cuantificación². Actualmente existen numerosos métodos de cuantificación de ácidos nucléicos³. El procedimiento clásico, que utiliza el marcaje radioactivo después de electroforesis en gel, está siendo abandonado porque conlleva algunos problemas^4,5. La introducción de sustancias fluorescentes, como el bromuro de etídio (BrEt), que se unen estequiométricamente a los ácidos nucléicos y emiten una intensidad de fluorescencia proporcional a la cantidad de ácidos nucléicos a los cuales se han unido, ha solucionado los problemas del marcaje radioactivo^6,7. Sin embargo, la exacta cuantificación de las bandas fluorescentes obtenidas constituye todavía el punto débil de las técnicas moleculares. En el mercado se puede encontrar para la cuantificación una variedad de dispositivos de elevado coste y en algunos casos de complejo manejo. Entre estos existen también analizadores de imagen que, en general, proporcionan cuantificaciones no muy precisas debido a la metodología inadecuada de determinación de la señal inespecífica ("fondo") presente en el gel, y la simple utilización del perfil de niveles de gris medios de cada calle del gel para la cuantificación densitométrica de la señal específica, sin tener en ninguna cuenta el área de banda correspondiente^8,9. Por todo esto, hemos diseñado un método simple basado en el análisis digital de imagen e implementable mediante cualquier programa de análisis de imagen, que permite realizar una precisa cuantificación de bandas de ácidos nucléicos desarrollados en gel de agarosa. Este trabajo describe el método de análisis de imagen diseñado y su validación.

[Título] [Material y Métodos] [Resultados] [Discusión] [Iconografía] [Bibliografía]

Francisco Arrebola, MS.
Copyright © 1996, Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital Universitario, Universidad de Granada, 18012 Granada, España. Reservados todos los derechos.